單克隆抗體的制備采用了什么技術(shù)?
日期：2026-01-15 10:42:17
制備單克隆抗體的核心技術(shù)是雜交瘤技術(shù)，這一技術(shù)由Köhler和Milstein在1975年發(fā)明，其核心原理是將能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞與能無限增殖的骨髓瘤細胞進行融合，得到兼具兩種細胞特性的雜交瘤細胞。具體的技術(shù)流程和涉及的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)如下：
4、抗體檢測與克隆化
1、免疫動物
向?qū)嶒瀯游铮ǔＳ眯∈螅w內(nèi)注射特定抗原，刺激其免疫系統(tǒng)產(chǎn)生能分泌針對該抗原抗體的B淋巴細胞。
2、細胞融合
采用聚乙二醇（PEG）介導(dǎo)融合法，或電融合技術(shù)，將免疫小鼠脾臟中的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞進行融合。
3、選擇性篩選
3、選擇性篩選
將融合后的細胞置于HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)。骨髓瘤細胞因缺乏特定酶無法在HAT培養(yǎng)基存活；未融合的B淋巴細胞在體外培養(yǎng)條件下壽命有限，會自行凋亡；只有融合成功的雜交瘤細胞可以存活并增殖。
4、抗體檢測與克隆化
采用ELISA等方法篩選出能分泌目標(biāo)抗體的雜交瘤細胞，再通過有限稀釋法或軟瓊脂克隆法進行單細胞克隆，得到可以穩(wěn)定分泌單克隆抗體的細胞株。
5、抗體的大量制備
5、抗體的大量制備
可通過體外細胞培養(yǎng)或體內(nèi)誘生腹水兩種方式大量獲取單克隆抗體。
隨著生物技術(shù)的發(fā)展，也出現(xiàn)了一些新型的單克隆抗體制備技術(shù)，例如噬菌體展示技術(shù)、轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)等，這些技術(shù)可以繞開雜交瘤技術(shù)的部分限制，制備人源化或全人源的單克隆抗體。
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