怎么確保純化蛋白的生物活性？
日期：2025-05-16 14:08:41
表達(dá)階段：
低溫誘導(dǎo)（如 18℃）減少錯誤折疊，添加共表達(dá)伴侶蛋白（如 PDI）促進(jìn)二硫鍵形成。
分泌表達(dá)至培養(yǎng)基（如酵母 / 哺乳動物細(xì)胞），避免胞內(nèi)降解。
純化階段：
緩沖液含穩(wěn)定劑（如 5% 甘油、1mM DTT），維持 pH 6.5-7.5。
膜蛋白使用溫和去垢劑（如 n-Dodecyl-β-D-maltoside）保持天然構(gòu)象。
活性檢測：
酶類：熒光底物法（如糜蛋白酶活性檢測，比活性＞1000 U/mg）。
受體 - 配體結(jié)合：SPR 檢測 KD 值（如 IL-6 與其受體結(jié)合親和力＜1nM）。
