1、基本營養(yǎng)物質(zhì)

（1）糖

六碳糖主要能源、維持滲透壓，含葡萄糖1-5%。

（2）氨基酸

維持生存需12種氨基酸（精、胱、亮、異亮、賴、蛋、苯丙、蘇、色、組、酪、纈）。谷氨酰胺需量最大,缺乏時細胞生長不良。

單細胞培養(yǎng)或細胞量少時,所需氨基酸的種類和量增多，細胞主要利用左旋氨基酸異構(gòu)體。

（3）維生素

細胞大部分需水溶性B族維生素，Vitc不可少，1-10mg/100ml可促進正常細胞生長繁殖。

2、促生長因子、激素類物質(zhì)

3、其它物質(zhì)

基本元素、微量元素、促細胞貼附物質(zhì)(纖粘連蛋白、層粘連蛋白laminin、IV型膠原、氨基多糖類)

4、水

主要成分和生存環(huán)境,要求高純度水。

5、溫度

哺乳動物及人源細胞最適培養(yǎng)溫度為35℃—37℃,對低溫耐受力比高溫強。39℃以上受損→死亡；不低于0℃時（0℃-34℃），細胞能生存，但代謝降低、分裂延緩。

6、氣體環(huán)境和pH

需O2、CO2，通氧量過大對細胞有毒害。

CO2主要與維持pH有關(guān)，細胞培養(yǎng)最佳pH為7.2—7.4，通過緩沖系統(tǒng)和調(diào)節(jié)CO2含量，維持正常pH。

開放培養(yǎng)要求5%CO2環(huán)境、HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸)10—50mmol/ml可防止pH變化。

含Earle’s緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)基適合于5％CO2的培養(yǎng)條件，Hanks’緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)基僅含有0.35g/L NaHCO3，不能用于5％CO2的環(huán)境，若放入CO2培養(yǎng)箱，溶液將迅速變酸，使用時應(yīng)注意。

7、濕度和光

開放培養(yǎng)相對濕度控制在95%。細胞培養(yǎng)需避光，紫外線或可見光可造成核黃素、酪氨酸、色氨酸等產(chǎn)生有毒的光產(chǎn)物，抑制細胞生長，降低其貼壁能力。

8、影響細胞生長的其它因素

接觸橡膠用品、收集細胞時離心速度過大、細胞接種濃度過低等。