病毒或毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，失去對易感動物的致病力，謂之中和試驗。本試驗主要用于：（1）從待檢血清中檢出抗體，或從病料中檢出病毒，從而診斷病毒性傳染?。唬?SPAN lang=EN-US>2）用抗毒素血清檢查材料中的毒素或鑒定細(xì)菌的毒素類型；（3）測定抗病毒血清或抗毒素效價；（4）新分離病毒的鑒定和分型，中和試驗不僅可在易感的實驗動物體內(nèi)進行，亦可在細(xì)胞培養(yǎng)上或雞胚上進行。試驗方法主要有簡單定性試驗、固定血清稀釋病毒法、固定病毒稀釋血清法、空斑減少法等。

1、血清中和實驗鑒定新城疫

血清中和實驗既可用已知抗雞新城疫病毒的血清來鑒定可疑病毒，又可用已知的新城疫病毒來測定雞血清中是否含有特異性抗體，以確定雞群是否感染過新城疫。中和實驗可以在雞胚或細(xì)胞培養(yǎng)以及易感雞中進行。方法是：在雞新城疫免疫血清（或待檢血清）中，加入一定量的待檢病毒（或已知病毒），兩者混合均勻后，接種10～11日齡的SPF雞胚，或雞胚成纖維細(xì)胞，或有易感性的雞，并設(shè)立不加血清的病毒對照。結(jié)果注射血清和病毒混合材料的雞胚或雞不死亡，雞胚成纖維細(xì)胞無病變，而對照組死亡或細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)病變，則肯定為新城疫病毒。

2、血清中和實驗診斷豬瘟

將不同稀釋度的血清與已知濃度的稀釋病毒混合，再接種細(xì)胞培養(yǎng)物進行培養(yǎng)，18-24h后進行熒光抗體檢查；或與豬瘟兔化弱毒疫苗（HCLV）中和，接種到兔中觀察兔體溫反應(yīng)，以此確定血清的終點滴度。在西歐最常用的方法是過氧化物酶中和實驗（NPLA），而在一些北美洲和拉丁美洲國家則多使用免疫過氧化物酶單層實驗（1PMA）方法。

3、血清中和實驗檢測豬繁殖與呼吸綜合征

一般來說，在群體水平上血清學(xué)診斷易操作，特異性強，敏感性高。但對個體的檢測則比較困難，有時出現(xiàn)非特異性反應(yīng)，但可以在2～3周后取樣復(fù)測解決此問題。血清學(xué)檢測一般用吸附實驗（如IPMA、IF、ELISA），這些實驗常用某種抗原型的病毒進行，對其他抗原異型病毒抗體的靈敏度較低。應(yīng)用抗體結(jié)合試驗，在病豬感染了7～14天檢出抗病毒抗體，30～50天抗體滴度出現(xiàn)高峰。有些在病豬感染后3～6個月內(nèi)血清轉(zhuǎn)為陰性，有些病豬血清陽性維持較久。中和抗體在病豬感染后出現(xiàn)較慢，但滴度不高?？稍诟腥竞?SPAN lang=EN-US>3-4周檢測到中和抗體，這種抗體能維持1年或更長時間。有報道，在血清中和實驗中使用補體能提高試驗的靈敏度。關(guān)于病豬感染后血清陽性持續(xù)時間的長短，目前尚未進行廣泛深入的研究，因其有可能隨實驗方法不同而異。母源抗體半衰期為12～14天，一般仔豬在出生后4～8周內(nèi)可檢測到病毒，隨母豬生產(chǎn)時的滴度及所用試驗方法而異。在污染的環(huán)境中，血清學(xué)檢測為陽性的母豬所產(chǎn)仔豬能在3～6周齡時血清轉(zhuǎn)為陽性。應(yīng)用巨噬細(xì)胞分離病毒以及利用兩類血清型病毒的IPMA在實驗室容易操作，這種試驗可用MARC-145細(xì)胞系增殖歐洲型病毒和美洲型病毒操作。使用MARC-145細(xì)胞系做間接免疫熒光實驗（1FA）能順利進行PRRSV血清學(xué)反應(yīng)。目前，靈敏度高、特異性強商品化的ELISA試劑盒已經(jīng)上市。同時，國內(nèi)學(xué)者還開發(fā)了乳膠凝集試劑盒，可用于PRRSV抗體快速監(jiān)測。

血清中和實驗檢測PRRS抗體雖然特異性好，但PRRS的SN抗體比IFA抗體在血清中出現(xiàn)得晚，一般在感染后的4～6周才出現(xiàn)中和抗體，因此SN不適宜進行早期診斷。Christianson等（1992）報道SN的敏感性比IFA低，Yoon等（1994）對常規(guī)SN進行改良，在實驗中加入20%豚鼠血清以增加補體的含量，從而提高SN的敏感性，在感染后的9～11天即可檢測到較高滴度的SN抗體。SN抗體比IFA抗體存留的時間長，可維持半年以上。但由于對急性感染的敏感性較差，要求血清無污染，而且細(xì)胞培養(yǎng)工作量大，技術(shù)性強，目前僅限于實驗室研究應(yīng)用。

4、病毒中和實驗（VNT）診斷禽流感

以中和實驗來鑒定或滴定流感病毒時，常用雞胚或組織培養(yǎng)細(xì)胞，操作方法與其他病毒（如NDV）的中和實驗相同。一般常用固定病毒稀釋血清法，IOOEIDs或1000TCID5的AIV與RED處理過的倍比稀釋的血清等量混合，室溫lh，每個雞胚或每瓶細(xì)胞接種0.2ml，每個稀釋度接種4個胚或細(xì)胞瓶，37℃孵育72h至7天，檢查雞胚尿囊液的血凝活性或細(xì)胞培養(yǎng)物的血細(xì)胞吸附作用，按標(biāo)準(zhǔn)方法算出中和效價，不出現(xiàn)血凝活性或血細(xì)胞吸附作用的最高稀釋度即為血清中和抗體滴定。

NT實驗是最敏感而特異的血清學(xué)方法，只有抗體與病毒顆粒上的表面抗原相對應(yīng)、特別是與吸附到宿主細(xì)胞上的病毒表面抗原相對應(yīng)時，才能在實驗中取得滿意的顯示效果。因此，某一個血清型的中和實驗抗體只與同組內(nèi)地其他病原表現(xiàn)出有限的交叉反應(yīng)。由于病毒中和實驗操作煩瑣，耗時費料，臨床上幾乎不用，但作為經(jīng)典方法在病毒鑒定中起著重要的作用，許多新的檢測方法都要以之為標(biāo)準(zhǔn)來進行比較。